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尺寸排阻色谱ICPMS联用测定功能饮料多维片中维生素B12

时间:2018-12-14 15:28 来源:未知 作者:admin

  维生素B12是一族含钴的维生素,又称钴胺素,按照代替基的分歧可分为氰钴胺、甲钴胺、羟钴胺和腺苷钴胺,高档动物无法本身合成钴胺素,只能从食物中摄取,钴胺素在红细胞生成、神经系统发育及某些卵白质的合成的过程中发生主要感化。钴胺素中甲钴胺、羟钴胺和腺苷钴胺均不不变,添加于保健品和婴儿奶粉中的钴胺素为人工合成的氰钴胺[1~3],氰钴胺是以钴为核心的共同物,其分子量为1355.4,含钴量为4.3%。中国国度尺度划定婴儿奶粉中必需添加维生素B12, 其含量范畴经换算后为10~72 ng/g, 市售婴儿奶粉维生素B12添加量集中在10~20 ng/g[4]。目前,保健品中维生素B12测定国标方式为液相色谱法(HPLC)[5],但HPLC方式因活络度较低,只合用于维生素B12含量较高的保健品的测定,无法现实测得含量在 ng/g级婴儿奶粉中的维生素B12[6~8],因而中国国度尺度方式采用复杂且耗时的微生物法[9]测定。近年来,一些色谱质谱联用手艺(LCMS)测验考试测定保守方式较难检测的维生素B12[10]。Luo等[11]等操纵酶消解的方式消弭了保健品和奶粉中卵白质,再用LCMS测得了维生素B12的含量,色谱保留时间约为9 min, 方式检出限为2 ng/g,但基质干扰较为严峻。Raju等[12]采用消融离心取清液的体例提取早餐谷物和多维片中的维生素B12, 再由基于C18柱的HPLCICPMS联用测定,保留时间为9 min,方式检出限小于1 ng/g。Yang等[13]采用微波辅助萃取的体例提取保健品中的维生素B12,再由基于C18柱的HPLC-ICP-MS定量测定,保留时间为9 min。Baker等[14]采用CE-ICP-MS联用的方式研究了各类钴胺素的色谱行为。Guggisberg等[15]用免疫亲和柱富集HPLC检测的方式测定了肉类食物中维生素B12的含量,富集后的检出限为2 ng/g。近年来,色谱电感耦合等离子质谱联用手艺在食物、生物材料、情况等范畴有有普遍的使用[16~20],它连系了色谱的高效分手劣势和电感耦合等离子体质谱的高活络度和低干扰的长处,除了用于形态阐发, 还可用于保守方式难测得的痕量组分的测定。本尝试采用固相微萃取柱富集SECICPMS联用测定功能饮料、多维片和婴儿奶粉中的报酬添加的维生素B12。与保守国标法比拟, 本方式取样量小、试剂人工耗损少、周期短,特别对奶粉的测定具有奇特劣势,与基于C18柱的HPLCICPMS联用的方式比拟,本方式不需要会影响雾化效率的高浓度甲醇作为流动相,活络度高,峰型锋利, 阐发时间短,阐发了文献未测验考试较难测定的奶粉样品[11,12]。跟着色谱电感耦合等离子体质谱联用手艺的普及,基于SECHPLCMS测定维生素B12的方式会获得普遍的使用。2尝试部门2.1仪器与试剂LC20AB液相色谱仪(日本岛津公司),BioSeps2000尺寸排阻色谱柱可分手0.87~300 kDa的物质(美国菲罗门公司);X7电感耦合等离子体质谱仪及其工作站(美国Thermal);色谱与ICP-MS用Peek管相连,电子触发采集数据;画图软件OriginPro 7.0;MilliQ Gradient超纯水净化器(美国Millipore);318型离心计心情(美国Sigma公司);0.22 μm无机滤膜(中国楚定科技公司);OASIS HLB C18 SPE柱(3 mL,60 mg,美国Waters公司)。钴尺度溶液1000 mg/L(美国Spex公司);维生素B12(氰钴胺,美国SigmaAldrich公司);NaH2PO4, Na2HPO4, HCl和NaOH均为阐发纯,乙腈、甲醇均为色谱纯;功能饮料、多维片、5个奶粉样品采集于商场的品牌奶粉(编号1~5),所采集样品已说明添加的维生素B12为氰钴胺。2.2SEC色谱前提以及ICPMS前提2.2.1SEC色谱前提ICPMS在无加氧安装的环境下不耐受无机流动相,因而本尝试流动相为无机磷酸缓冲盐,但高浓度的磷酸缓冲盐会使采样锥和截取锥口处堆积盐分,选择低浓度磷酸盐有益于庇护仪器,最终尝试采用10 mmol/L磷酸盐溶液作为流动相,流速为0.7 mL/min。凡是,高容量的定量环有益于提高活络度,但尝试在洗脱SPE柱时采用了无机溶剂,而进样液中大量无机溶剂会使ICPMS熄火,调查20, 50 ,100和200 μL的定量环后, 确定50 μL试液不会使ICPMS熄灭,尝试采用50 μL定量环。2.2.2ICPMS前提选择Co59作为定量同位素,经调谐仪器次要参数如表1所示。

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